广告招募

回放

关于细胞鉴定的冷知识

2021年07月01日 09:10:53      来源:上海雅吉生物科技有限公司 >>进入该公司展台     阅读量:56

分享:

Q: 什么是细胞系鉴定?
A: 所谓细胞系鉴定即通过 STR(短串联重复)信息所建立细胞系的遗传特性。一旦细胞系的遗传特性被确立,细胞系就应该定期的检测,以防止出现细胞系被误认或交叉污染的情况。

Q: 为什么要进行细胞系鉴定?
A: 由于细胞系发生交叉污染或身份误认,可以导致实验数据的无效和数据的误导。NIH 最近已发出公告,讨论细胞系鉴定的必要性,并且越来越多的期刊要求文章发表前需提供细胞鉴定材料。

Q: 如何进行细胞系鉴定?
A: 细胞系鉴定目前主要基于 Promega GenePrint® 10 系统。这种系统可以通过多重 PCR 结合荧光探针检测技术,对人源 7 个 STR 位点以及 1 个性别决定位点进行检测。

Q: 什么时候需细胞系鉴定?
A: 当建立或获得一个新的细胞系时;在细胞冻存之前或细胞已连续培养 2 个月时;在开始系列实验或发表文章之前;细胞系表现不稳定或结果与预期差别较大时;当实验室使用超过一种细胞系时,所有细胞系最好先鉴定以排除交叉污染的可能。

Q: 如何提供鉴定样本?
A: 每种细胞需单独收集在 1.5 ml 离心管中,细胞数目在 0.5 x 106 至 1 x 106 之间。细胞需要离心沉淀,并且竟可能去除上清培养基,沉淀冰冻保存。细胞样本需保持冰冻状态直到基因组 DNA 提取完毕。并且在 1.5 ml 管壁外标明细胞数目。

Q: 如何知道细胞系是否发生交叉污染了?
A: 如果存在细胞系之间发生交叉污染,那么在进行 STR 位点检测的时候,多个位点会出现两个以上的峰。峰高值表示该等位基因的信号强度,理论上峰值与样本的 DNA 浓度有直接的关系。因此,存在交叉污染的混合细胞系中,其中一个位点中某些峰会明显高于其他的峰,其中大峰是属于混合细胞系中那个主要细胞系,而小峰则属于那个次要细胞系。值得注意的是,当发生两个或以上细胞混合的时候,检测结果看起来非常像细胞系的「遗传不稳定」。当一个细胞系存在亚群时,尤其是一些癌细胞系,由于遗传不稳定的存在,在一些位点的 STR 特性会不同。因此经验丰富的分子专家是非常重要的,他们能够帮助分析复杂的电泳图谱(STR 峰图),从而判断是否由于发生细胞系交叉污染而导致多等位基因情况。

Q: 如何进行数据库比对?

  1.  


Q: 如何判断细胞系是否正确?
A:收到细胞系鉴定结果以及 STR 信息,可以自行和参考数据库进行比对。如果细胞样本的每个 STR 位点和参考细胞 STR 位点都能重合匹配,即说明该细胞系正确,反之则说明你的细胞系可能被错误标记,交叉污染或发生遗传不稳定。一般说来,匹配度 ≥ 80% 即可认为该细胞系正确,匹配度<80% 则说明该细胞系的来源需要被怀疑。。如果细胞系被鉴定出发生交叉污染或错误标记,则需要拿更早代数的细胞进行鉴定,从而找到问题的起源或者直接从可靠的机构购买一株新的细胞系。

Q: 如果细胞系没有在数据库中比对出结果怎么办?
A: 如果已知数据库中没有找到你的细胞信息,你可以用自己的细胞遗传信息建立自己的遗传特性,以便后期进行自己细胞库的比对。

Q: 细胞系交叉污染或错误鉴定对研究是否有影响?
A: 答案是肯定的。使用错误的细胞系或者是被污染的细胞系做研究,只会造成时间,金钱和精力的损失,以及造成实验结果的不一致和不可重复。因此如果用被污染或错误的细胞系做研究,在发表文章或做进一步研究时极有可能需要用正确的细胞再重复实验。

版权与免责声明:
1.凡本网注明"来源:兴旺宝装备总站"的所有作品,版权均属于兴旺宝装备总站,转载请必须注明兴旺宝装备总站。违反者本网将追究相关法律责任。
2.企业发布的公司新闻、技术文章、资料下载等内容,如涉及侵权、违规遭投诉的,一律由发布企业自行承担责任,本网有权删除内容并追溯责任。
3.本网转载并注明自其它来源的作品,目的在于传递更多信息,并不代表本网赞同其观点或证实其内容的真实性,不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时,必须保留本网注明的作品来源,并自负版权等法律责任。 4.如涉及作品内容、版权等问题,请在作品发表之日起一周内与本网联系。