鲤鱼卵黄蛋白原(VTG)ELISA试剂盒实验ELISA结果判定常用的几种方法:
1)目测定性法:加入底物经酶解和终止反应后,肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于)阴性对照;与阴性对照的颜色接近者,判定为阴性。
2)以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2~3SD,作为阳性结果的阈值。
3)以P/N值(阳性孔OD值/阴性孔OD值)大于或等于2.1为阳性;P/N值小于2.1,但大于1.5为可疑;P/N小于1.5为阴性。
4)定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。
我们将在鲤鱼卵黄蛋白原(VTG)ELISA试剂盒操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下,以期给客户带来一些启发,提高试验质量。
11985 S100钙结合蛋白(S100)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for S100 Calcium Binding Protein (S100) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
11986 粘蛋白1(MUC1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Mucin 1 (MUC1) 48T/96T Bos taurus; Bovine (Cattle)
11987 粘蛋白1(MUC1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Mucin 1 (MUC1) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
11988 粘蛋白1(MUC1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Mucin 1 (MUC1) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
11989 睫状神经营养因子(CNTF)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Ciliary Neurotrophic Factor (CNTF) 48T/96T Chicken (Gallus)
11990 睫状神经营养因子(CNTF)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Ciliary Neurotrophic Factor (CNTF) 48T/96T Sus scrofa; Porcine (Pig)
11991 睫状神经营养因子(CNTF)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Ciliary Neurotrophic Factor (CNTF) 48T/96T Oryctolagus cuniculus (Rabbit)
11992 上皮性钙黏附蛋白(CDHE)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Cadherin, Epithelial (CDHE) 48T/96T Bos taurus; Bovine (Cattle)
11993 上皮性钙黏附蛋白(CDHE)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Cadherin, Epithelial (CDHE) 48T/96T Chicken (Gallus)
11994 上皮性钙黏附蛋白(CDHE)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Cadherin, Epithelial (CDHE) 48T/96T Sus scrofa; Porcine (Pig)
11995 嗜酸粒细胞趋化因子(ECF)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Eosinophil Chemotactic Factor (ECF) 48T/96T Bos taurus; Bovine (Cattle)
11996 嗜酸粒细胞趋化因子(ECF)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Eosinophil Chemotactic Factor (ECF) 48T/96T Equus caballus; Equine (Horse)
11997 嗜酸粒细胞趋化因子(ECF)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Eosinophil Chemotactic Factor (ECF) 48T/96T Cavia (Guinea pig )
11998 嗜酸粒细胞趋化因子(ECF)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Eosinophil Chemotactic Factor (ECF) 48T/96T Rhesus monkey (Simian)
11999 白介素8受体α(IL8Rα)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Interleukin 8 Receptor Alpha (IL8Ra) 48T/96T Oryctolagus cuniculus (Rabbit)
12000 白介素8受体α(IL8Rα)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Interleukin 8 Receptor Alpha (IL8Ra) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
12001 内分泌腺来源血管内皮生长因子(EG-VEGF)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Endocrine Gland Derived Vascular Endothelial Growth Factor (EG-VEGF) 48T/96T Bos taurus; Bovine (Cattle)
12002 红细胞生成素(EPO)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Erythropoietin (EPO) 48T/96T Capra hircus; Caprine (Goat)
12003 红细胞生成素(EPO)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Erythropoietin (EPO) 48T/96T Equus caballus; Equine (Horse)
12004 红细胞生成素(EPO)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Erythropoietin (EPO) 48T/96T Rhesus monkey (Simian)
12005 E选择素(SELE)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Selectin, Endothelium (SELE) 48T/96T Bos taurus; Bovine (Cattle)
12006 E选择素(SELE)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Selectin, Endothelium (SELE) 48T/96T Canis familiaris; Canine (Dog)
12007 E选择素(SELE)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Selectin, Endothelium (SELE) 48T/96T Capra hircus; Caprine (Goat)
12008 E选择素(SELE)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Selectin, Endothelium (SELE) 48T/96T Equus caballus; Equine (Horse)
12009 血管内皮细胞蛋白C受体(PROCR)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Protein C Receptor, Endothelial (PROCR) 48T/96T Bos taurus; Bovine (Cattle)
12010 血管内皮细胞蛋白C受体(PROCR)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Protein C Receptor, Endothelial (PROCR) 48T/96T Sus scrofa; Porcine (Pig)
12011 颗粒酶M(GZMM)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Granzyme M (GZMM) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
12012 颗粒酶M(GZMM)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Granzyme M (GZMM) 48T/96T Sus scrofa; Porcine (Pig)
12013 颗粒酶M(GZMM)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Granzyme M (GZMM) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
12014 凋亡相关因子(FAS)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Factor Related Apoptosis (FAS) 48T/96T Bos taurus; Bovine (Cattle)
12015 凋亡相关因子(FAS)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Factor Related Apoptosis (FAS) 48T/96T Rhesus monkey (Simian)
12016 凋亡相关因子配体(FASL)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Factor Related Apoptosis Ligand (FASL) 48T/96T Rhesus monkey (Simian)
12017 酸性成纤维细胞生长因子(FGF1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Fibroblast Growth Factor 1, Acidic (FGF1) 48T/96T Bos taurus; Bovine (Cattle)
12018 酸性成纤维细胞生长因子(FGF1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Fibroblast Growth Factor 1, Acidic (FGF1) 48T/96T Capra hircus; Caprine (Goat)
12019 酸性成纤维细胞生长因子(FGF1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Fibroblast Growth Factor 1, Acidic (FGF1) 48T/96T Chicken (Gallus)
12020 酸性成纤维细胞生长因子(FGF1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Fibroblast Growth Factor 1, Acidic (FGF1) 48T/96T Sus scrofa; Porcine (Pig)
12021 突触囊泡蛋白Ⅰ(SYT1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Synaptotagmin I (SYT1) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
12022 25kDa突触关联蛋白(SNAP25)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Synaptosomal Associated Protein 25kDa (SNAP25) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
12023 补体1抑制因子(C1INH)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Complement 1 Inhibitor (C1INH) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
12024 补体1抑制因子(C1INH)鲤鱼卵黄蛋白原(VTG)ELISA试剂盒检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Complement 1 Inhibitor (C1INH) 48T/96T Oryctolagus cuniculus (Rabbit)
12025 促生长激素释放激素(GHRH)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Growth Hormone Releasing Hormone (GHRH) 48T/96T Bos taurus; Bovine (Cattle)
下面我们分析Elisa试验操作中可能影响结果的原因,并给出相应的解决办法:
1 选择试剂:选择质量优良的检测试剂,严格按照试剂说明书进行操作,操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。
2 加样:可能原因:
1)血清或血浆标本分离不好即进行加样;
2)手工操作中,加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长(特别是室内温度较高时); 3)加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。
解决办法:
1) 标本为血清:将血液先自然存放1-2小时后,再用3000rmp离心15分钟;标本为血浆:必须使用含抗凝剂的血液标本收集管,采血后必须立即颠倒*混合5-10次,放置一段时间后,3000rpm离心15分钟;若在几天内检测,可放在2-8℃冰箱中,若要贮存,则置于-20℃的低温冰箱内。
2) 加样后及时放入孵箱。
3) 加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自动加样,选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。
5) 标本较多时,请分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育时未贴封片或加盖,使标本或稀释液蒸发,吸附于孔壁,难于清洗*;
2) 孵育时间人为延长,导致非特异性结合紧附于反应孔周围,难以清洗*。解决办法:
1) 贴封片或加盖;
2) 按说明步骤严格控制操作时间。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔与孔之间液体交叉。
2) 采用半自动洗板机洗板时,洗液量不足,导致洗板不*;洗板针堵塞,抽吸不*;洗板不畅,导致洗板效果差。
3) 反应板过多造成洗板等待时间长。 解决办法:
1) 保证洗液注满各孔,洗板针畅通,洗完板后在吸水纸(选择干净、无或少尘的吸水材料)上轻轻拍干;
2) 合理安排,或多用几台洗板机。
5鲤鱼卵黄蛋白原(VTG)ELISA试剂盒显色:可能原因:
1) 显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂;
2) 加显色剂时溅出孔外造成液体回流。解决办法:
1) 显色剂尽量在临用前配制,坚持不用过期显色剂,肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用; 2) 加样时保持显色剂不外流;
3) A、B液应避免接触金属器械。
6 终止:可能原因如加终止液时产生较多气泡,导致假阳性增加。所以在加终止液时应避免产生气泡。
7 读板:如读板时板底不清洁等。应保证酶标板清洁。
所以在整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸; 尽可能实现ELISA检测标准自动化,有效提高检测质量。
在实际操作中,除了选择优良试剂外,必须严格按照操作步骤进行操作,同时作好室内质控、室间质评,以严谨的工作作风检测每一份标本,才能保证检测质量。现在国内已有相当数量的单位拥有全自动酶标仪,这对于实现ELISA标准化检测、提高检测质量起到了重要作用。
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