豚鼠内皮素1(ET-1)ELISA试剂盒实验ELISA结果判定常用的几种方法:
1)目测定性法:加入底物经酶解和终止反应后,肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于)阴性对照;与阴性对照的颜色接近者,判定为阴性。
2)以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2~3SD,作为阳性结果的阈值。
3)以P/N值(阳性孔OD值/阴性孔OD值)大于或等于2.1为阳性;P/N值小于2.1,但大于1.5为可疑;P/N小于1.5为阴性。
4)定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。
我们将在豚鼠内皮素1(ET-1)ELISA试剂盒操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下,以期给客户带来一些启发,提高试验质量。
10328 髓鞘型脂肪酸结合蛋白(FABP8)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Fatty Acid Binding Protein 8, Myelin (FABP8) 48T/96T Homo sapiens (Human)
10329 Ⅲ型胶原(COL3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Collagen Type III (COL3) 48T/96T Homo sapiens (Human)
10330 Ⅳ型胶原(COL4)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Collagen Type IV (COL4) 48T/96T Homo sapiens (Human)
10331 中性粒细胞弹性蛋白酶(ELA2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Elastase 2, Neutrophil (ELA2) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
10332 透明质酸(HA)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Hyaluronic Acid (HA) 48T/96T General
10333 氨基己糖苷酶Aα(HEXα)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Hexosaminidase A Alpha (HEXa) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
10334 半乳糖苷酶β(GLβ)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Galactosidase Beta (GLb) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
10335 核糖核酸酶H(RNASEH)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Ribonuclease H (RNASEH) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
10336 脱氧核糖核酸酶Ⅰ样2(DNASE1L2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Deoxyribonuclease I Like Protein 2 (DNASE1L2) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
10337 丙酮酸激酶(PK)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Pyruvate Kinase, Liver And RBC (PK) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
10338 白细胞特异性转录因子1(LST1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Leukocyte Specific Transcript 1 (LST1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
10339 髓细胞触发受体1(TREM1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Triggering Receptor Expressed On Myeloid Cells 1 (TREM1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
10340 窖蛋白(CAV1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Caveolin 1 (CAV1) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
10341 Ⅰ型胶原α2(COL1α2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Collagen Type I Alpha 2 (COL1a2) 48T/96T Oryctolagus cuniculus (Rabbit)
10342 α1-微球蛋白(α1M)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Alpha-1-Microglobulin/Bikunin Precursor (a1M) 48T/96T Rhesus monkey (Simian)
10343 转化生长因子β2(TGFβ2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Transforming Growth Factor Beta 2 (TGFb2) 48T/96T Canis familiaris; Canine (Dog)
10344 转录因子20(TCF20)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Transcription factor 20 (TCF20) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
10345 干扰素β(IFNβ)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Interferon Beta (IFNb) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
10346 心钠肽(ANP)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Atrial Natriuretic Peptide (ANP) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
10347 *(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Anti Mullerian Hormone (AMH) 48T/96T Homo sapiens (Human)
10348 *蛋白酶1(PRSS1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Protease, Serine 1 (PRSS1) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
10349 着丝粒蛋白I(CENPI)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Centromere Protein I (CENPI) 48T/96T Homo sapiens (Human)
10350 免疫球蛋白G4(IgG4)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Immunoglobulin G4 (IgG4) 48T/96T Homo sapiens (Human)
10351 补体1抑制因子(C1INH)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Complement 1 Inhibitor (C1INH) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
10352 前列腺素F受体(FP)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Prostaglandin F Receptor (FP) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
10353 前列腺素E受体2(EP2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Prostaglandin E Receptor 2 (EP2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
10354 载脂蛋白C1(APOC1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Apolipoprotein C1 (APOC1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
10355 麦芽糖酶糖化酶(MGA)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Maltase Glucoamylase, Intestinal (MGA) 48T/96T Homo sapiens (Human)
10356 Ⅱ型前胶原羧基端原肽(PⅡCP)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Procollagen II C-Terminal Propeptide (PIICP) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
10357 膜联蛋白A5(ANXA5)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Annexin A5 (ANXA5) 48T/96T Homo sapiens (Human)
10358 β2-微球蛋白(β2M)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Beta-2-Microglobulin (b2M) 48T/96T Homo sapiens (Human)
10359 转铁蛋白受体2(TFR2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Transferrin Receptor 2 (TFR2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
10360 着丝粒蛋白H(CENPH)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Centromere Protein H (CENPH) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
10361 T-细胞激活连接蛋白(LAT)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Linker For Activation Of T-Cell (LAT) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
10362 抗SSB/La抗体(Anti-La)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Anti-SSB/La Antibody (Anti-La) 48T/96T Homo sapiens (Human)
10363 着丝粒蛋白E(CENPE)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Centromere Protein E (CENPE) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
10364 间隙连接蛋白43(CX43)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Connexin 43 (CX43) 48T/96T Homo sapiens豚鼠内皮素1(ET-1)ELISA试剂盒 (Human)
10365 踝蛋白(TLN)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Talin (TLN) 48T/96T Homo sapiens (Human)
下面我们分析Elisa试验操作中可能影响结果的原因,并给出相应的解决办法:
1 选择试剂:选择质量优良的检测试剂,严格按照试剂说明书进行操作,操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。
2 加样:可能原因:
1)血清或血浆标本分离不好即进行加样;
2)手工操作中,加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长(特别是室内温度较高时); 3)加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。
解决办法:
1) 标本为血清:将血液先自然存放1-2小时后,再用3000rmp离心15分钟;标本为血浆:必须使用含抗凝剂的血液标本收集管,采血后必须立即颠倒*混合5-10次,放置一段时间后,3000rpm离心15分钟;若在几天内检测,可放在2-8℃冰箱中,若要贮存,则置于-20℃的低温冰箱内。
2) 加样后及时放入孵箱。
3) 加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自动加样,选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。
5) 标本较多时,请分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育时未贴封片或加盖,使标本或稀释液蒸发,吸附于孔壁,难于清洗*;
2) 孵育时间人为延长,导致非特异性结合紧附于反应孔周围,难以清洗*。解决办法:
1) 贴封片或加盖;
2) 按说明步骤严格控制操作时间。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔与孔之间液体交叉。
2) 采用半自动洗板机洗板时,洗液量不足,导致洗板不*;洗板针堵塞,抽吸不*;洗板不畅,导致洗板效果差。
3) 反应板过多造成洗板等待时间长。 解决办法:
1) 保证洗液注满各孔,洗板针畅通,洗完板后在吸水纸(选择干净、无或少尘的吸水材料)上轻轻拍干;
2) 合理安排,或多用几台洗板机。
5豚鼠内皮素1(ET-1)ELISA试剂盒显色:可能原因:
1) 显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂;
2) 加显色剂时溅出孔外造成液体回流。解决办法:
1) 显色剂尽量在临用前配制,坚持不用过期显色剂,肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用; 2) 加样时保持显色剂不外流;
3) A、B液应避免接触金属器械。
6 终止:可能原因如加终止液时产生较多气泡,导致假阳性增加。所以在加终止液时应避免产生气泡。
7 读板:如读板时板底不清洁等。应保证酶标板清洁。
所以在整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸; 尽可能实现ELISA检测标准自动化,有效提高检测质量。
在实际操作中,除了选择优良试剂外,必须严格按照操作步骤进行操作,同时作好室内质控、室间质评,以严谨的工作作风检测每一份标本,才能保证检测质量。现在国内已有相当数量的单位拥有全自动酶标仪,这对于实现ELISA标准化检测、提高检测质量起到了重要作用。
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