传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)核酸扩增检测试剂盒(PCR-荧光探针法)

产品名称：传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)

产品规格：50T

产品运输：低温运输

产品保存：-20℃保存

产品有效期：一年

产品特点：

本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏核酸检测试剂盒 。

PCR反应鉴定——PCR反应条件：

储存条件：

14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法

1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。

3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。

4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。

5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

原理是由一对引物介导，能在动植物体外对特定基因(DNA)片断进行快速酶促扩增，经过n个热循环扩增，扩增产物中所含特定基因数是原始模板数的(1+E)n(0＜E＜1,扩增效率＝倍，使得检测扩增产物中的特定基因成为可能。

特异性强

PCR反应的特异性决定因素为：

①引物与模板DNA特异正确的结合；

②碱基配对原则；

③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性；

  ④靶基因的特异性与保守性。
实验过程：

一、试剂准备

1. DNA模板

2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）

3．10×PCR Buffer

4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM

5．Taq酶

二、操作步骤 

1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。

      10×PCR buffer             5μl

      dNTP mixl                 4μl

       引物1（10pM）               2μl

       引物2（10PM）              2μl

       Taq酶（2U/μl）            1μl

      DNA模板（50ng-1μg/μl）    1 μl

      加ddH2O至               50 μl

    视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。

2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。

3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

三、注意事项

１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。设立一个专用的PCR实验室。

２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。

３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。

４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。

５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。

６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。

７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。

反应五要素：

参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。

③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC最好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。

⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。

⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列最好有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。

⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。

引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。

服务流程：

接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。

4-硝基儿茶酚(标准品) 2-苄基烯酸 质量规格：

4’-O-甲基补骨脂查尔酮B 5-氨基-2-氯嘧啶 质量规格 gt;95.0%(T)

4β-羟基黄芪紫檀烷苷(标准品) 苄氧羰基-羟基甘氨酸 质量规格 gt;95.0%(T)

5,7,4'-三羟基-8-甲基二氢黄酮(标准品) 4-氯-2-氟苄 质量规格 gt;95.0%(T)

5,7-二羟基色原酮 2,4-二氟苄 质量规格：

5-O-甲基维斯阿米-4'-O-β-D-呋喃芹糖基-  4,4'-(1,2-二乙基亚乙基)二苯酚 质量规格：

5-O-甲基维斯阿米苷（标准品） 1-(4-羟丁基)-4-甲基哌 质量规格：

5-羟甲基糠（标准品） 2-(叔-丁基)苯基异酸酯 质量规格：

5-羟色酸（标准品） 2-哌酮 质量规格 gt;93.0%(N)

5-羟色盐酸盐（标准品） 1-苄基-4-基-4-苯基哌啶盐酸盐 质量规格 gt;98.0%(N)

6'''-阿魏酰斯皮诺素 顺式-4-氨基环己盐酸盐 质量规格 gt;98.0%(GC)(N)

6''-O-二酰基染料木苷 二盐基性硬脂酸铅 质量规格 gt;95.0%(GC)

6''-二酸沙苑子苷单酯 头孢西酮 质量规格 gt;98.0%(T)

6'-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷 2,4-二氨基-6-羟基嘧啶 质量规格 gt;98.0%(GC)(N)

6'-O-β-D-芹糖獐芽菜苷 5,6-二氯烟酸甲酯 质量规格 gt;99.0%(GC)
传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)半胱氨酸蛋白酶抑制剂3(CST3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)Human GREM1(Gremlin-1) ELISA Kit包装5g

43kDa Tar DNA结合蛋白(TDP43)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)Human TERT(omerase reverse transcriptase) ELISA Kit包装100g

结合珠蛋白(Hpt)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)Human IL17B(Interleukin-17B) ELISA Kit包装25g

胰腺再生蛋白Ⅳ(REG4)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)Human TLN1(Talin-1) ELISA Kit包装5g

蛋白Z依赖性蛋白酶抑制因子(ZPI)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)Human RELN(Reelin) ELISA Kit包装1g

白介素21(IL21)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)Human MRC2(C-type mannose receptor 2) ELISA Kit包装5g

补体因子B(CFB)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)Human NR1H3(Oxysterols receptor LXR-alpha) ELISA Kit包装1g

传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)核酸扩增检测试剂盒(PCR-荧光探针法)