非苛养非肠道革兰氏阴性杆菌鉴定试剂盒（比色法）说明书
【产品名称】
通用名称：非苛养非肠道革兰氏阴性杆菌鉴定试剂盒（比色法）
英文名称：API 20 NE
【包装规格】
25 测试/盒
【预期用途】
该产品用于非苛养、非肠道革兰阴性杆菌的鉴定。
该产品用于鉴定非苛养、非肠道革兰阴性杆菌（如假单胞菌属、不动杆菌属、黄杆菌属、莫拉菌属、弧菌属
和气单胞菌属等）的标准鉴定系统，包括 8 个常规试验、12 个同化试验和 1 个数据库。
【检验原理】
API 20 NE 试剂条由装有脱水底物的 20 个微型管构成。常规试验接种重溶培养基的盐水细菌悬液。在
培养过程中，代谢产生颜色变化，此变化可为自发或通过加入试剂显示。同化试验接种低培养基，如果它
们能够使用相应的底物，则细菌生长。依照读数表读取反应，通过参考分析曲线指标或使用鉴别软件得到鉴
别。
【储存条件及有效期】
2~8℃储存，有效期为 12 个月。
【适用仪器】
-
麦氏标准比浊管 (Ref. 70 900) No. 0.5
-
API 20 NE 分析鉴定系统 (Ref.20 090) 或 apiweb™鉴定软件 (Ref.40 011) (咨询生物梅里埃)
【样本要求】
API 20 NE 不直接用于临床或其他标本。
按照标准微生物学技术，必须首先在适合的培养基（如胰蛋白酶解酪蛋白）上分离要鉴定的微生物。
【检验方法】
氧化酶试验
必须按照生产商的使用说明，进行氧化酶试验。应当在结果单上记录结果，因为它是最后图谱的一个有
机部分（第 21 个鉴定试验）。
菌落
API 20 NE 只应用于不属于肠杆菌科的非苛养革兰阴性杆菌。
注 1：有些非肠道的革兰阴性杆菌亦为氧化酶阴性（嗜麦芽黄单胞菌、不动杆菌…）。这些微生物也可以
用 API 20 NE 鉴定，但必须根据其它细菌学或临床标准加以选择。
注 2：对营养要求多或需要适当处理注意事项的苛养微生物（如布鲁氏菌和弗朗西丝氏菌），未包含在 API
20 NE 的数据库内。必须采用其他方法排除或证实它们的存在。
试条的准备
准备一个培养盒、盘和盖子，向盘的底部倒入约 5mL 蒸馏水或去离子水【或任何不含添加剂或可能释放
气体（如氯气、二氧化碳等）的化学物的水】，创造一种湿气。在盘的边缘部分记录标本编号。（不要在盖上
记录编号，因为在操作期间它可能错位。）从各个包装中取出试剂条。将试剂条放入培养盒中。
接种物的准备
? 按照本产品说明书“警告和注意事项"段落所示，打开一安瓿 API NaCI 0.85 %培养基（2 mL），或使
用含 2 mL 不含添加剂的 0.85 %生理盐溶液。
? 使用吸管或滴管，通过抽吸或通过连续接触，从琼脂糖培养基上挑取 1 - 4 个形态相同的克隆。建议
使用早期培养物（18 - 24 小时）。
? 配制混悬液至浊度等于 0.5 McFarland。此混悬液在配制后必须立即使用。
注：调整接种物密度至 0.5 McFarland 非常重要；否则 API 20 NE 试剂条试验可能不能正确发挥功能。
特别是，较弱的接种物可能导致假阴性结果。在操作试剂条的过程中，不要接触反应杯，接种后不要将试剂
条长时间暴露空气。
试条的接种
? 用同一根吸管将盐水混悬液加到试验管（不是反应杯），接种试验 NO3到 PNPG。将试剂条稍前倾，将吸
管或滴管的顶部靠在杯的侧面，以避免管的底部形成气泡。非苛养非肠道革兰氏阴性杆菌鉴定试剂盒（比色法） 版本号 07615K -CN –2009/11
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?
按照“警告和注意事项"中所示，打开 1 个 API AUX 培养基安瓿，向安瓿加入约 200 L 剩余的盐混悬液。
用吸管混匀，避免形成气泡。
?
用混悬液注满由 GLU 至 PAC 试验管和杯。当心液面必是平的或稍凸，不能呈凹或新月形。杯子装得不
满或过满可能给出不正确的结果。
?
向 3 个下划线试验（GLU、ADH 和 URE）的杯子加矿物油，直至形成凸出的新月形。
?
盖上培养盒，在 29°C ± 2°C 培养 24 小时（± 2 小时）。
【阳性判断值】
对于不同生化反应预期结果的范围，查阅本说明书末尾的鉴别表。
【检验结果的解释】
读取试剂条
?
孵育期后，通过参阅判读表，判读试剂条。
?
在结果单上记录所有自发反应（GLU、ADH、URE、ESC、 GEL 和 PNPG）。
?
为保护同化反应免受空气播散的污染，应当进行两个试验 NO3 和 TRP 的判读。要做这一点，在 NO3 和
TRP 试验判读期间，用培养盒盖子遮盖同化反应。
?
NO3 试验：
-
各加一滴 NIT1 和 NIT2 试剂至 NO3 杯。
-
5 分钟后，红色表示阳性反应，记录在报告单上。
-
由于氮气的产生（表现为存在小气泡）有可能引起阴性反应：加 2~3 mg Zn 试剂到 NO3杯中。
-
5 分钟后，保持无色的杯子表明阳性反应，记录在报告单上。如果杯子变为粉红色，反应为阴性，因为管
中存在硝酸盐，被锌还原为亚硝酸盐。
用于细菌鉴定的反应是硝酸盐还原。当上述二个反应（产生 NO2 或 N2）中的任何一个为阳性时，硝酸盐
还原反应为阳性。
但是，N2的产生则可单独用作补充试验（参阅分析图谱索引）。
?
检测：
加 1 滴 JAMES 试剂。立即发生反应：全杯出现粉红色表明阳性结果，记录在结果单上。
?
同化试验：观察细菌生长。不透明杯子表明阳性反应。
偶尔，1 个杯子显示为弱生长。在这种情况，通过与试剂条上的其他试验强度比较，结果应当记录为 或
±。
注意:
一旦进行了上述判读，如“解释"段落中所示，鉴定是可能的。在下列情况，必须重新孵育：
-
无区别
-
无法接受或可疑的图谱；
-
如果对获得的图谱标注了以下备注：
在 48 小时孵育前鉴定是无效的
使用习惯或滴管，通过抽吸吸走 NIT 1、NIT 2 和 JAMES 试剂，立即用矿物油掩蔽试验 NO3 和 TRP，以便形
成凸的新月形。在 29°C ± 2°C 重新孵育 24 小时，除了只应在 24 小时判读的前 3 个试验（NO3、TRP 和 GLU），
其余试验再读一次结果。
说明：
采用数字谱获得鉴定。
?
测定使用率：
在结果表上，将结果分成 3 组，每组标记为编号 1、2 或 4。在每组内加阳性反应相应的数字，得到一个
7 位数；氧化酶反应构成第 21 个反应，如果为阳性则数值为 4。
?
鉴定：
这采用数据库（V7.0）进行
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棒状杆菌鉴定用编码册
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查找图谱中的数字谱。
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