REF 20 100 / 20 160 07584E - CN - 2004/05

® 20 E

肠杆菌和其它革兰氏阴性杆菌鉴定系统

概要说明

API 20 E 是肠杆菌科和其它非苛养 G-杆菌的标准鉴定系

统 包括 21 个标准化微型生化测试和鉴定资料库 可鉴定

的菌谱名录 请参考说明书后的鉴定表

原理

API 20 E 试验条是由 20 个含干燥底物的小管所组成 这些

测定管用细菌悬浮液接种 培养一定时间後 通过代谢作

用产生颜色的变化 或是加入试剂後变色而观察其结果

根据说明表判读反应 参照分析图索引或使用鉴定软件得

到鉴定结果

试剂盒内容物

25  测试试剂盒 ( 货号. 20 100)

- 25 API 20 E 试条

- 25 培养盒

- 25 结果报告单

- 1 个封口夹

- 1 份产品说明书

100 测试试剂盒 ( 货号. 20 160)

- 100 API 20 E 试条 (4x25 试条)

- 100 培养盒

- 100 结果报告单

-  1 个封口夹

-  1 份产品说明书

试条的成分

API 20 E 试条的成分请参阅说明书后的结果判读表

必需但未提供的试剂和材料

试剂

- 0.85 % API NaCl 培养基 5 ml (Ref. 20 230) or

API 悬浮培养基 5 ml (Ref. 20 150)

- API 20 E 附加试剂盒 (Ref. 20 120) 或

单个的附加试剂  TDA (Ref. 70 402)

JAMES (Ref. 70 542)

VP 1 + VP 2 (Ref. 70 422)

NIT 1 + NIT 2 (Ref. 70 442)

- Zn 试剂 (Ref. 70 380)

- 氧化酶 (Ref. 55 635*)

* 目录中没有销售的国家 请使用相近的试剂

- 矿物油 (Ref. 70 100)

- API 20 E 数值分析图谱(Ref. 20 190) 或

鉴定软件

材料

- 吸管或 PSI 管

- 安瓿开启器

- 安瓿架

- 微生物实验室一般设备

可能需要的附加试剂

- API OF 培养基 (Ref. 50 110) :

用于测定发酵型或氧化型代谢作用

- API M 培养基 (Ref. 50 120) :

用于测定兼性厌氧菌的运动性

警告和注意

•  仅供体外诊断和微生物质控使用

•  仅供专业人员使用

• 此试剂盒中含有动物源性成分 已知所使用原始材料和动

物的卫生状况不能*保证其不含传染性的物质 因此我

们建议所有样品应被视为具有传染性 并应按通常的安全

措施对其进行正确处理 勿吸入或咽下

• 所有标本 细菌培养物 接种物应被视为 具有传染性并

应进行正确处理 在整个试验过程中 要遵守无菌技术要

求和通常使用的防范措施 可参照 NCCLS M29-A 保

护试验室工作人员免受仪器生物公害和通过血液 体液

组织传染的疾病的侵害-当前版本 的内容 另外的防护

措施 可参照 微生物和生物医学实验室的生物研究安全

-CDC/NIH – 新版本 或参照各国正在使用的规章执

行

• 不要使用过期的试剂

• 使用前 请检查包装和成分是否完整

• 不要使用已经破损的试条 杯子破坏 干燥剂小袋已打开

等

• 有关产品性能的数据均由严格按照作步骤所进行的试验得

出 任何操作步骤的改变或偏离均会影响试验结果

• 试验结果的判断应由合格的微生物家所作 同时应将病

史 标本来源 菌落和显微形态考虑在内 如有可能 再

作一些附加试验 尤其是抗生素敏感谱

储存条件

试验条采用铝袋包装并附有干燥剂

一旦打开铝袋(*) 请使用封口夹(试剂盒已含有)重新封口

以保证试条的干燥 把铝袋撕开处末端放入打开的夹子并

小心的加紧两端 开启铝袋后 在 2-8 环境下 试验条可

享有 10 个月的有效期(或包装盒上的有效期 以较短时间

为准)

(*) 建议开封的方法 在封口下方剪开铝箔装 为防止意外

损坏干燥剂 开封时应保持铝箔袋垂直

标本  采集和前处理

API 20 E 不能直接用于临床或其他标本

需要进行鉴定的微生物必须首先根据标准微生物处理技术

于适合肠杆菌和/或非苛养革兰氏阴性杆菌的培养琼脂 例

如 麦康凯 上培养分离

IVD

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api ® 20 E  07584E –  CN - 2004/05

bioMérieux ® SA 中文 - 2

使用说明

氧化酶试验

必须按照制造商的使用说明进行氧化酶试验 由于它是

终图谱的主要数据 请将其记录于结果报告单上 第二十

一个试验

试条的准备

• 准备一个培养盒 盘和盖子 倒入约 5ml 蒸馏水或软化

水[或其它不含杂质或产生挥发性气体的化学物质 如

Cl2, CO2,等 ]于盘的蜂窝小凹中 造成一个湿室

• 在盘的沿边写上菌株号(不要写在盖上 以免错放)

• 从包装中取出试验条放到盘中

• 将试条置于孵育箱内

注意 API 20 E 只能用于肠道细菌和或非苛养的 G- 杆菌

苛养菌主要指对营养需求有特殊需要的菌(例 布鲁氏菌属

Brucella 和 法朗西丝菌属 Francisella) 这些菌没有包括在

API 20 E 数据库中 必须采用有效方法 排除这些菌的存

在

接种物的准备

• 根据"警告及注意"一栏所列方法打开一安瓿 API 0.85%

NaCl 培养基 (5ml)或一安瓿 API 悬浮培养基(5 ml) 或

使用 5ml 0.85 %无杂质 无菌盐水

• 用吸管或接种针从分离物的平板上挑取单个分纯菌落至悬

浮基物中 建议使用新鲜培养 18-24 小时

• 仔细研匀以达到均一的细菌悬液

制备好的菌悬液必须立即使用

注意 大多数弧菌 Vibrio 均嗜盐 如怀疑菌株为弧菌

请使用 0.85% NaCl (5ml) 培养基

试条的接种

• 用同一根吸管 将菌悬液充满 CIT VP 和 GEL 管

的管部和杯部

• 其它管仅充满管部(不是杯部)

• ADH, LDC, ODC, H 2 S 和 URE 管 用矿物油覆盖 以形

成厌氧环境

• 盖上培养盒

• 于 36°C ± 2°C 孵育 18-24 小时

判读和解释

试条的判读

• 孵育后 根据使用手册中的读数表判读各反应结果

• 如果 3 个或 3 个以上测定 GLU 试验+或- 为阳性结果

记录所有自发反应于结果报告单上并观察需要附加试剂的

试验的结果

- TDA 试验 加 1 滴 TDA 试剂  深褐色为 阳性反应 记

录于报告单上

- IND 试验 加 1 滴 JAMES 试剂 反应立即发生  粉红

色出现在整个反应应管者为 阳性 记录于报告单上

- VP 试验 加 1 滴 VP 1 和 1 滴 VP 2 试剂 至少等待

10 分钟  浅粉或 红色表明为 阳性结果 记录于报告单

上 如 浅粉红色在 10 至 12 分钟内出现 判断结果为 阴

性

注意 吲哚产生试验必须后进行 因为该反应释放的气

体产物会干扰试条的其他试验 在加入附加试剂后 请小

心勿调换培养盒盖

• 如果加入附加试剂前阳性结果 包括 GLU 试验 的数量

少于 3 个

- 重新培养 24 小时 ± 2小时 且不要加任何试剂

- 重新进行需要加入附加试剂的测试 如前说明

- 为了完成鉴定 可能需要进行补充试验 参考有关鉴定

的段落

解释

鉴定结果从 数字索引中获得

• 所得的反应结果编为数字图谱

所得反应的类型必须以数字化形式记录在报告单 每 3 个

测定为一组 每个以 1 2 和 4 标明 在每组中 阳性反

应以相应的数字相加 由 API 20 NE 的 20 个测定可得一

个 7 位数 氧化酶反应构其第 21 个反应 如阳性则为

4

• 鉴定

使用数据库 (V4.0)进行鉴定

* 根据数字图谱

- 从使用手册的读数表中寻找数字图谱

* 使用鉴定软件

- 在键盘上输入 7 位阿拉伯数字的图谱

在某些情况下 7 位数检索编码还不能区分细菌 必须进行

以下一些补充试验

- 硝酸盐还原到亚硝酸盐(NO2)和氮气(N2) 各加一滴 Nit

1 和 Nit 2 试剂于葡萄糖 GLU 管内 待 2~3 分钟后  红

色表示 阳性结果(NO2) 阴性反应 黄色 可能由于还原

至 N2 有时还有气泡 加 2-3mg 锌粉到葡萄糖 GLU

管 5 分钟后 如果管保持 黄色表示 阳性结果(N2) 记录

于报告单 如果测定变 粉红 这明是 阴性反应 硝酸盐仍

留管内 被锌粉还原 该反应用于检测革兰阴性 氧化酶

阳性的杆菌

注意 出于和吲哚试验同样的原因 参考 试条的判读

中的注意项 硝酸盐还原试验必须后进行

- 动力 (MOB) 接种一安瓿 API M 培养基 参见产品说明

书

- 麦康凯 MacConkey 培养基生长实验(McC) 接种一个

麦康凯 MacConkey 平板 参见产品说明书

- 葡萄糖氧化 (OF-O) 接种一安瓿 API OF 培养基 参见

产品说明书

- 葡萄糖发酵 (OF-F) 接种一安瓿 API OF 培养基 参见

产品说明书

这些在数值编码本开始部分有所介绍的补充试验 可以组

成 9 位数的数值索引 从而可以用鉴定软件获得鉴定结

果

5 315 173 (57) Enterobacter gergoviae

如果分辨率很低 提议进行进一步的试验 请参考鉴定软

件或数值分析索引

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质 量 控 制

培养基 试验条和试剂在有效期内不同阶段需作系统的质量控制 对进行质控实验室 推荐标准菌株 1.  大肠埃希菌

Escherichia coli ATCC ® 25922 或以下菌株之一

2.  嗜麦芽糖寡养单胞菌 Stenotrophomonas maltophilia

ATCC 51331

3.  阴沟肠杆菌 Enterobacter cloacae

ATCC 13047

4.  奇异变形杆菌 Proteus mirabilis

ATCC 35659

5.  肺炎克雷伯菌肺炎亚种 Klebsiella pneumoniae ssp

pneumoniae  ATCC 35657

ATCC : American Type Culture Collection, 10801 University Boulevard, Manassas, VA 20110-2209, USA.

梅里埃20100 肠杆菌鉴定试剂盒API20E

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