ZC-52390 兔白细胞介素6(IL-6)ELISA试剂盒预期应用:本试剂盒是一个夹心酶免疫分析法体外定量检测血清、血浆、组织、细胞上清及相关生物液体样本中的浓度。
细胞样本裂解方案
贴壁细胞裂解方法:
一、单层贴壁细胞总蛋白的提取:
1、倒掉培养液。
2、每瓶细胞加5ml 4℃预冷的PBS(0.01M pH7.2~7.3)。平放轻轻摇动1min洗涤细胞,然后弃去洗液。重复以上操作两次,共洗细胞三次以洗去培养液。将PBS弃净后把培养瓶置于冰上。
3、按1ml裂解液加10 μl PMSF(100mM),摇匀置于冰上。(PMSF要摇匀至无结晶时才可与裂解液混合。)
4、每瓶细胞加400 μ 含PMSF的裂解液,于冰上裂解30min,为使细胞充分裂解培养瓶要经常来回摇动。
5、裂解完后,用干净的刮棒将细胞刮于培养瓶的一侧(动作要快),然后用枪将细胞碎片和裂解液移至1.5ml离心管中。(整个操作尽量在冰上进行。)
6、于4℃下12000rpm离心5min。(提前开离心机预冷)
7、将离心后的上清分装转移倒0.5min的离心管中放于-20℃保存。
二、悬浮细胞裂解方法:
1. 培养1×106-1×107个细胞;
2. 将细胞转移到15ml圆形离心管,4?C, 500g离心5min;
3. 小心去除上清,加入5ml预冷PBS重悬细胞,4?C, 500g离心5min;
4. 尽可能多的去除上清,小心不要碰到细胞沉淀。
5. 在上步骤获取的细胞中,加入200ul ProcartaPlex Cell Lysis Buffer。
6. 吹吸混匀8-10次,冰上孵育5min;
7. 将所有细胞转移到1.5ml离心管;
8. 4?C, 14000g(离心机最大转速)离心10min;
9. 将上清转移到新管中。该上清可立即用于检测或者保存在-80?C。
10. 按照多因子检测试剂盒操作方法检测。样本孔加入25ul细胞裂解液和25ul Universal Assay Buffer。
可选步骤:
建议细胞裂解后上清进行蛋白定量检测。我们推荐使用Lowry法蛋白定量检测。建议将所有样本使用预冷的ProcartaPlex Cell Lysis Buffer调整样本蛋白浓度方为4-8 mg/ml。
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