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固定相按孔隙深度又分为表面多孔型(薄壳型)和全多孔型。表面多孔型的基体是球形玻璃珠,在玻璃表面包覆一层数微米厚的多孔活性物质如硅胶、氧化铝、聚酰胺、离子交换树脂、分子筛等,直径为25~70um。也可以制成化学键合固定相,这种固定相的多孔层薄、传质速率快、柱效高,适用于快速分离;填充均匀紧密、机械强度高、能承受高压的情况,适合于较简单的样品及常规分析;但由于多孔层薄,进样量受限制。全多孔型固定相由硅胶颗粒凝聚而成,一般制成筛分很窄(1um到几微米)、颗粒很小(5~10um)的全多孔微球型或非微球型。全多孔型固定相比表面积大,柱容量大,小颗粒全孔型固定相(直径为10um)孔洞浅,传质速率仍很快,柱效高,分离效果好,适合于复杂样品、痕量组分的分离分析,是目前HPLC中应用泛的固定相。
2.流动相
液相色谱中的流动相,也称溶剂,由洗脱剂和调节剂两部分组成。前者的作用是将样品溶解和分离,后者则用以调节洗脱剂的极性和强度,以改变组分在柱中的移动速度和分离状态。
由于HPLC中流动相是液体,它对组分有亲和力,并参与固定相对组分的竞争。因此,正确选择流动相直接影响组分的分离度。对流动相的基本要求如下。
1)所选用的流动相稳定性好,不与固定相互溶,不发生不可逆作用,不与样品组分发生化学反应,保持柱效或柱子的保留值性质较长时间不变。
2)择性好,对待测样品有足够的溶解能力,以提高测定的灵敏度。
3)与所用检测器相匹配,如应用紫外吸收检测器时,不能用对紫外光有吸收的溶剂。
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