一、产品介绍
1、原理及适用范围
粪链球菌普遍存在于水环境中，为条件致病菌，它来源于人和温血动物的粪便，可以在水中存活很长时间，引起人类疾病。是水体受到粪便污染的重要指标菌，更能客观的反映水质卫生状况。中华人民共和国城镇建设标准在对城市供水、饮用水水质监测中增加了水中粪链球菌的检测指标。粪链球菌检测板是一种预先制备好的一次性培养基产品，含有标准的营养培养基，冷水可溶性的吸水凝胶和脱氢酶指示剂氯化三苯基四氮唑（TTC），菌落在检测板上呈红色带黄晕斑点。本产品适合于生活饮用水、生产加工用水及食品中粪链球菌的测定。
执行标准：中华人民共和国标准《饮用天然矿泉水检验方法》（GB/T 8538）；中华人民共和国进出口商品检验行业标准《出口商品中粪链球菌群检验》（SN/T 0475）。
2、操作方法
2.1水样品检测
2.1.1 水样过滤：将灭菌的过滤装置连接到抽滤瓶上，用灭菌镊子夹取直径47 mm～50 mm，孔径为0.45μm的灭菌滤膜，放在滤器底部，旋紧盖子，将250 mL水样注入滤器中抽滤。
2.1.2 揭开检测板上层膜，在检测板纸片上加1 mL无菌水湿润后，迅速用无菌镊子将过滤水样的滤膜移放在检测板纸片上（滤膜截留细菌面向上），滤膜与纸片之间不要夹留着气泡，贴好上层膜。
2.2食品样品检测
2.2.1 取25 g（或25 mL）样品放入装有225 mL生理盐水的均质袋中，以8000 r/min均质1～2 min，制成1:10样品均液，根据样品污染程度及检验需要，可进一步制成10倍递增的样品稀释液。
2.2.2 将粪链球菌检测板上层膜不干胶标签部分揭开，用无菌吸管吸取1 mL样品稀释液均匀滴加到纸片上，迅速贴好上层膜并水平晃动检测板，静置10 s左右，待样品稀释液被吸附在滤纸上。每个稀释度接种两个检测板作为重复。
2.3 培养：将检测板叠在一起，倒置于恒温培养箱内，36℃±1℃，培养15～24 h。
3、结果判读
在检测板（滤膜）上生长的红色带黄晕的斑点即为粪链球菌阳性，若纸片上的红色斑点无黄晕则为粪链球菌阴性。
4、计数原则及报告方式
4.1 滤膜过滤水样：以滤过一张无菌滤膜后产生的菌落数计算，选择菌落数在20～100CFU的检测板进行计数后即为250 mL水样品中所含的菌落总数。结果以CFU/250 mL为单位报告。
4.2 食品样品计数
4.2.1 以生长有30～300CFU的检测板为计数适宜范围。
4.2.2 若只有一个稀释度检测板上的菌落数在计数合适范围30～300CFU之间，则计算两个检测板菌落数的平均值，再除以相应的稀释倍数，作为每克（毫升）中菌落总数结果。
4.2.3 若有两个连续稀释度在适宜计数范围内时，按式（1）计算：
∑C
N= ———————— •••••••••••••••••••（1）
（n1+0.1n2）d
式中：
N——样品中粪链球菌菌落数；
∑C——两个连续稀释度检测板（含适宜范围菌落数的检测板）粪链球菌菌落之和；
n1——适宜范围菌落数的*个稀释度（低）检测板个数
n2——适宜范围菌落数的第二个稀释度（高）检测板个数
d——*稀释度的稀释倍数
示例：
稀释度 | 1:10（*个稀释度） | 1:100（第二个稀释度） |
菌落数 | 245，247 | 31，30 |
（245+247+31+30）
N= —————————— =2514
（2+0.1×2）×10-1
结果表述为2.5×103CFU/g(ml)。
4.2.4 若所有稀释度检测板上均无菌落生长，则以小于1/d（d—*低稀释倍数）计算。
4.2.5低数值的估算：如果实验样品原液（水及液体饮料）或初始稀释悬液（其他样品）的两个检测板上的菌落数均小于30CFU，计算两个检测板上的菌落数的平均数。计算式（2）：
∑C
NE = —— •••••••••••••••••••（2）
nd
式中：
NE——每毫升或每克样品中菌数的估算值；
∑C——两个检测板上菌落数的和；
n——检测板的数量；
d——样品初始悬液或实际接种悬液的稀释倍数。
4.2.6大数值的估算：若所有稀释度的检测板上菌落数均大于300CFU，计数*接近300CFU的检测板上的菌落并计算出平均数，其他检测板可记录为多不可计。结果计算式（3）：
∑C
NE = —— •••••••••••••••••••（3）
nd
式中：
NE——每毫升或每克样品中菌数的估算值；
∑C——两个检测板上菌落数之和；
n——检测板的数量；
d——与样品悬液相*的稀释倍数。
5、结果报告
固体样品以CFU/g为单位报告，液体样品以CFU/mL为单位报告。
6、附加说明
注意使用过的检测板上带有活菌，需及时按照生物安全废弃物处理原则进行处理。
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