绵羊痘病毒(SPPV)核酸扩增检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 

检验原理:
本试剂盒采用磁珠法提取血清或血浆样品中的病毒核酸，利用针对HBV核酸保守区设计的特异性引物和荧光探针，配以PCR反应液，应用实时荧光定量PCR检测和高效内标技术，实现绵羊痘病毒(SPPV)核酸试剂盒检测。
产品名称：绵羊痘病毒(SPPV)核酸试剂盒

规格：48T/盒  50T/盒 

分类：PCR试剂盒

储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。

运输：低温、避光，快递免费送货上门。

帛科样本采集、存放及运输：

1、样本采集：各类型样本按照常规方法采集；

2、存放：样本在2~8℃条件下保存应不超过72h，-70℃以下可长期保存，但应避免反复冻融（zui多冻融3次）；

3、运输：采用泡沫箱加冰密封进行运输。

高特异性：与其他病毒无交叉反应，无非特异性扩增；

高灵敏度：检测灵敏度可达10~100；

操作简便：该系列所有试剂均采用相同的体系和条件，可同时进行多个检测；

高通量：多种双重PCR检测以及三重PCR检测试剂盒。

绵羊痘病毒(SPPV)核酸扩增检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 

一、稀释标准曲线样品（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。

1. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。

2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液，*用带芯枪头，下同）。

3. 在 7 号管中加入 5 μL 阳性对照（浓度为 1×10E8 拷贝/μL，试剂盒提供)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

4. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

5. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。

二、样品 DNA 的制备

7. 用自选方法纯化样品的 DNA，本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。

8. 如果有 N 个样品，则需要进行 N+2 个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。

三、设置 qPCR 反应（20μL 体系，在样品制备室进行）

9. 如果做定量分析并且只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），6 个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做 1 次重复，则标记 N+4 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），1 个用于PCR 阳性对照。

PCR检测方法包括以下步骤：

(1)将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。

步骤(2)为：待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为肿瘤或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。

实验注意事项：

1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；

2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；

3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。

4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。

实时荧光定量PCR是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括绝对定量和相对定量）和定性分析。

主要服务：DNA或RNA的绝对定量分析、基因表达差异分析、基因分型。

主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR。

CD200R1L Others Human人CD200R1L / CD200R2 / CD200RLa人细胞裂解液(阳性对照)阿奇霉素Azithromycin质量规格：945-1030 ug /mg,二水物

角膜上皮细胞Many types of cells包装：5×105方(1ml)阿奇霉素（标准品）Azithromycin质量规格：效价测定

CST7 Others Mouse小鼠Cystatin 7 / CST7人细胞裂解液(阳性对照) 5-氨基水杨酸,美沙拉秦5-Aminosalicylic acid质量规格 gt;98%,BR

大鼠冠状动脉平滑肌细胞*培养基100mL盐酸喹那普利（标准品）Quinapril质量规格：HPLC法含量测定

NRK-52E大鼠肾细胞In NRK-52E rat kidney cells DMEM培养基+5%FBS爱普列特（标准品）Epristeride质量规格：UV法含量测定
RAG(小鼠肾腺癌细胞) 5×106cells/瓶×2MITOMYCINC C超级灰色，紫色或蓝色粉末COLD不sigma

WB-F344(大鼠肝上皮样干细胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0271D283 Med(人脑髓母细胞瘤细胞)5×106cells/瓶×2豹猫肺成纤维样细胞;LCL31,4-本二醇1,4-Bqnzqnqdimqthcnol 289-9-7

Asp2人胚胎肾细胞转化细胞;FC33安蝶呤相关物质B Mqthotrqxctq Rqlctqd CoMpound B;(S)-2-{4-[2,4-dicMinoptqridin-6yl)MqthylcMino]bqnzocMido}pqntcnqdioic ccid 1924/6/6

人肠微血管内皮细胞(HIMEC)( 5×105 )苄西林钠，英文名或英文缩写：Ampicillin wo7ium salt，级别：BR，150u/mg，规格：150ku

CL-0374KP-N-NS(人肾上腺神经母细胞瘤细胞(脑转移))5×106cells/瓶×2Cetrimide琼脂基础NA
GES-1人胃粘膜细胞potewwiumcaonatesesquihydrate碳酸钾一点五水合物1克CP

CM-M038小鼠肝内胆管上皮细胞*培养基100mL2,3-二安基炳醋言醋盐3-cmino-L-clcninq xy7nochloridq 148-97-9

HUM,正常人主动脉平滑肌细胞PepstatinA抑肽素25克BR，Ⅳ型，≥125CDU/mg

EB病毒转化的人B细胞;KMY0910真皮成纤维细胞*培养基100mLdCMP，2Na2'-脱氧胞苷-5'-嶙酸二钠2500UBR，98%

前列腺平滑肌细胞Many types of cells包装：5×105方(1ml)19783-14-3氢氧化Lead xy7noxide;Basic lead xy7noxide;Hydrated lead oxide
绵羊痘病毒(SPPV)核酸试剂盒3-苯氧基苯甲酸 标准品Perfluorononanoicacid 3739-38-6纯品型，0.1G特征形态 固态

2-Phenoxybenzoic acid,certified标准品Perfluorobutanoicacid 2243-42-7纯品型，100MG特征形态 固态

苯氧乙酸 标准品Perfluorobutanesulfonicacid 122-59-8纯品型，0.25G特征形态 固态