猴Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)ELISA试剂盒实验ELISA结果判定常用的几种方法:
1)目测定性法:加入底物经酶解和终止反应后,肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于)阴性对照;与阴性对照的颜色接近者,判定为阴性。
2)以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2~3SD,作为阳性结果的阈值。
3)以P/N值(阳性孔OD值/阴性孔OD值)大于或等于2.1为阳性;P/N值小于2.1,但大于1.5为可疑;P/N小于1.5为阴性。
4)定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。
我们将在猴Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)ELISA试剂盒操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下,以期给客户带来一些启发,提高试验质量。
12915 *原C(PGC)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Pepsinogen C (PGC) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
12916 芳香烃受体(AhR)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Aryl Hydrocarbon Receptor (AhR) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
12917 N-甲基-D-天氡氨酸离子能*受体2A(GRIN2A)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Glutamate Receptor, Ionotropic, N-Methyl-D-Aspartate 2A (GRIN2A) 48T/96T Homo sapiens (Human)
12918 趋化因子C-基元配体2(XCL2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Chemokine C-Motif Ligand 2 (XCL2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
12919 羧肽酶A3(CPA3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Carboxypeptidase A3, Mast Cell (CPA3) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
12920 *三磷酸酶(ITPA)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Inosine Triphosphatase (ITPA) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
12921 Persephin蛋白(PSPN)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Persephin (PSPN) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
12922 平足蛋白(PDPN)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Podoplanin (PDPN) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
12923 半*丰富血管生成诱导因子61(CYR61)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Cysteine Rich Protein, Angiogenic Inducer 61 (CYR61) 48T/96T Homo sapiens (Human)
12924 羧肽酶A3(CPA3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Carboxypeptidase A3, Mast Cell (CPA3) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
12925 卵泡刺激素受体(FSHR)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Follicle Stimulating Hormone Receptor (FSHR) 48T/96T Homo sapiens (Human)
12926 骨骼肌慢肌肌钙蛋白I(TNNI1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Troponin I Type 1, Slow Skeletal (TNNI1) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
12927 骨骼肌慢肌肌钙蛋白I(TNNI1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Troponin I Type 1, Slow Skeletal (TNNI1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
12928 血小板衍生生长因子C(PDGFC)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Plaet Derived Growth Factor C (PDGFC) 48T/96T Homo sapiens (Human)
12929 *9(KLK9)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Kallikrein 9 (KLK9) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
12930 赖氨酰氧化酶(LOX)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Lysyl Oxidase (LOX) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
12931 皮肤桥蛋白(DPT)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Dermatopontin (DPT) 48T/96T Homo sapiens (Human)
12932 骨骼肌快肌肌钙蛋白I(TNNI2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Troponin I Type 2, Fast Skeletal (TNNI2) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
12933 骨骼肌快肌肌钙蛋白I(TNNI2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Troponin I Type 2, Fast Skeletal (TNNI2) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
12934 锌结合α2-糖蛋白1(αZGP1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Alpha-2-Glycoprotein 1, Zinc Binding (aZGP1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
12935 RAS癌基因家族成员RAB37(RAB37)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for RAB37, Member RAS Oncogene Family (RAB37) 48T/96T Homo sapiens (Human)
12936 RIO激酶1(RIOK1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for RIO Kinase 1 (RIOK1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
12937 恶性脑肿瘤缺失蛋白1(DMBT1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Deleted In Malignant Brain Tumors 1 (DMBT1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
12938 钙调蛋白样蛋白3(CALML3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Calmodulin Like Protein 3 (CALML3) 48T/96T Homo sapiens (Human)
12939 白介素1α(IL1α)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Interleukin 1 Alpha (IL1a) 48T/96T Bos taurus; Bovine (Cattle)
12940 原卟啉原氧化酶(PPOX)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Protoporphyrinogen Oxidase (PPOX) 48T/96T Homo sapiens (Human)
12941 原卟啉原氧化酶(PPOX)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Protoporphyrinogen Oxidase (PPOX) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
12942 *脱羧酶抗酶1(OAZ1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Ornithine Decarboxylase Antizyme 1 (OAZ1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
12943 再生胰岛衍生蛋白3α(REG3α)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Regenerating Islet Derived Protein 3 Alpha (REG3a) 48T/96T Homo sapiens (Human)
12944 桥粒芯胶粘蛋白3(DSC3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Desmocollin 3 (DSC3) 48T/96T Homo sapiens (Human)
12945 表皮膜蛋白3(EMP3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Epithelial Membrane Protein 3 (EMP3) 48T/96T Homo sapiens (Human)
12946 半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶(GALT)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Galactose-1-Phosphate Uridylyltransferase (GALT) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
12947 肿瘤坏死因子受体超家族成员10A(TNFRSF10A)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Tumor Necrosis Factor Receptor Superfamily, Member 10A (TNFRSF10A) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
12948 血清淀粉样蛋白A2(SAA2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Serum Amyloid A2 (SAA2) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
12949 磷酸二酯酶12(PDE12)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Phosphodiesterase猴Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)ELISA试剂盒 12 (PDE12) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
12950 S100钙结合蛋白A14(S100A14)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for S100 Calcium Binding Protein A14 (S100A14) 48T/96T Homo sapiens (Human)
12951 *原A(PGA)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Pepsinogen A (PGA) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
下面我们分析Elisa试验操作中可能影响结果的原因,并给出相应的解决办法:
1 选择试剂:选择质量优良的检测试剂,严格按照试剂说明书进行操作,操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。
2 加样:可能原因:
1)血清或血浆标本分离不好即进行加样;
2)手工操作中,加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长(特别是室内温度较高时); 3)加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。
解决办法:
1) 标本为血清:将血液先自然存放1-2小时后,再用3000rmp离心15分钟;标本为血浆:必须使用含抗凝剂的血液标本收集管,采血后必须立即颠倒*混合5-10次,放置一段时间后,3000rpm离心15分钟;若在几天内检测,可放在2-8℃冰箱中,若要贮存,则置于-20℃的低温冰箱内。
2) 加样后及时放入孵箱。
3) 加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自动加样,选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。
5) 标本较多时,请分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育时未贴封片或加盖,使标本或稀释液蒸发,吸附于孔壁,难于清洗*;
2) 孵育时间人为延长,导致非特异性结合紧附于反应孔周围,难以清洗*。解决办法:
1) 贴封片或加盖;
2) 按说明步骤严格控制操作时间。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔与孔之间液体交叉。
2) 采用半自动洗板机洗板时,洗液量不足,导致洗板不*;洗板针堵塞,抽吸不*;洗板不畅,导致洗板效果差。
3) 反应板过多造成洗板等待时间长。 解决办法:
1) 保证洗液注满各孔,洗板针畅通,洗完板后在吸水纸(选择干净、无或少尘的吸水材料)上轻轻拍干;
2) 合理安排,或多用几台洗板机。
5猴Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)ELISA试剂盒显色:可能原因:
1) 显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂;
2) 加显色剂时溅出孔外造成液体回流。解决办法:
1) 显色剂尽量在临用前配制,坚持不用过期显色剂,肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用; 2) 加样时保持显色剂不外流;
3) A、B液应避免接触金属器械。
6 终止:可能原因如加终止液时产生较多气泡,导致假阳性增加。所以在加终止液时应避免产生气泡。
7 读板:如读板时板底不清洁等。应保证酶标板清洁。
所以在整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸; 尽可能实现ELISA检测标准自动化,有效提高检测质量。
在实际操作中,除了选择优良试剂外,必须严格按照操作步骤进行操作,同时作好室内质控、室间质评,以严谨的工作作风检测每一份标本,才能保证检测质量。现在国内已有相当数量的单位拥有全自动酶标仪,这对于实现ELISA标准化检测、提高检测质量起到了重要作用。
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