猴B病毒(BV)ELISA试剂盒实验ELISA结果判定常用的几种方法:
1)目测定性法:加入底物经酶解和终止反应后,肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于)阴性对照;与阴性对照的颜色接近者,判定为阴性。
2)以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2~3SD,作为阳性结果的阈值。
3)以P/N值(阳性孔OD值/阴性孔OD值)大于或等于2.1为阳性;P/N值小于2.1,但大于1.5为可疑;P/N小于1.5为阴性。
4)定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。
我们将在猴B病毒(BV)ELISA试剂盒操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下,以期给客户带来一些启发,提高试验质量。
13066 催乳素诱导蛋白(PIP)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Prolactin Induced Protein (PIP) 48T/96T Homo sapiens (Human)
13067 R-脊椎蛋白3(RSPO3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for R-Spondin 3 (RSPO3) 48T/96T Homo sapiens (Human)
13068 干扰素α21(IFNα21)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Interferon Alpha 21 (IFNa21) 48T/96T Homo sapiens (Human)
13069 唾液酸乙酰酯酶(SIAE)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Sialic Acid Acetylesterase (SIAE) 48T/96T Homo sapiens (Human)
13070 音猬因子(SHH)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Hedgehog Homolog, Sonic (SHH) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
13071 印度刺猬因子(IHH)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Hedgehog Homolog, Indian (IHH) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
13072 胰岛素样蛋白6(INSL6)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Insulin Like Protein 6 (INSL6) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
13073 尿皮质素2(UCN2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Urocortin 2 (UCN2) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
13074 尿皮质素3(UCN3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Urocortin 3 (UCN3) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
13075 组织蛋白酶G(CTSG)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Cathepsin G (CTSG) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
13076 膜联蛋白A1(ANXA1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Annexin A1 (ANXA1) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
13077 白蛋白启动子D位点结合蛋白(DBP)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for D Site Of Albumin Promoter Binding Protein (DBP) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
13078 V-Yes-1 Yamaguchi肉瘤病毒相关癌基因同源物(LYN)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for V-Yes-1 Yamaguchi Sarcoma Viral Related Oncogene Homolog (LYN) 48T/96T Homo sapiens (Human)
13079 神经生长因子诱导蛋白B(NGFIB)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Nerve Growth Factor IB (NGFIB) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
13080 生长因子受体结合蛋白2(Grb2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Growth Factor Receptor Bound Protein 2 (Grb2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
13081 毛状样蛋白1(COTL1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Coactosin Like Protein 1 (COTL1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
13082 腓骨蛋白7(FBLN7)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Fibulin 7 (FBLN7) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
13083 溶质载体家族1成员5(SLC1A5)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Solute Carrier Family 1, Member 5 (SLC1A5) 48T/96T Homo sapiens (Human)
13084 P物质(SP)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Substance P (SP) 48T/96T Canis familiaris; Canine (Dog)
13085 刺猬因子相互作用蛋白(HHIP)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Hedgehog Interacting Protein (HHIP) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
13086 微纤丝关联蛋白4(MFAP4)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Microfibrillar Associated Protein 4 (MFAP4) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
13087 左右决定因子1(LEFTY1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Left/Right Determination Factor 1 (LEFTY1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
13088 转胶蛋白(TAGLN)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Transgelin (TAGLN) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
13089 过氧化氢酶(CAT)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Catalase (CAT) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
13090 细胞色素P450氧化还原酶(CPR)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Cytochrome P450 Reductase (CPR) 48T/96T Homo sapiens (Human)
13091 弗林蛋白酶(FUR)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Furin (FUR) 48T/96T Homo sapiens (Human)
13092 微精蛋白β(MSMβ)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Microseminoprotein Beta (MSMb) 48T/96T Homo sapiens (Human)
13093 铜转运蛋白1(COPT1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Copper Transporter 1 (COPT1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
13094 *受体(VDR)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Vitamin D Receptor (VDR) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
13095 微粒体甘油三酸酯转运蛋白(MTTP)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Microsomal Triglyceride Transfer Protein (MTTP) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
13096 溶血磷脂酸受体1(LPAR1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Lysophosphatidic Acid Receptor 1 (LPAR1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
13097 围脂滴蛋白4(PLIN4)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Perilipin 4 (PLIN4) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
13098 含卷曲螺旋域蛋白80(CCDC80)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Coiled Coil Domain Containing Protein 80 (CCDC80) 48T/96T Homo sapiens (Human)
13099 热休克蛋白47(HSP47)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Heat Shock Protein 47 (HSP47) 48T/96T Homo sapiens (Human)
13100 核纤层蛋白B1(LMNB1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Lamin B1 (LMNB1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
13101 戴帽蛋白肌Z系β(CAPZβ)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Capping Protein Muscle Z Line Beta (CAPZb) 48T/96T Homo sapiens (Human)
13102 高尔基体蛋白A8家族成员A(GOLGA8A)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Golgin A8 Family, Member A (GOLGA8A) 48T/96T Homo sapiens (Human)
13103 成纤维细胞生长因子5(FGF5)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Fibroblast Growth Factor 5 (FGF5) 48T/96T Homo sapiens (Human)
13104 嵌套蛋白(NES)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Nestin (NES) 48T/96T Homo sapiens (Human)
13105 碳酸酐酶Ⅵ(CA6)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Carbonic Anhydrase VI (CA6) 48T/96T Homo sapiens (Human)
13106 透明质酸合酶2(HAS2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Hyaluronan Synthase 2 (HAS2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
13107 */*丰富端*丰富重复蛋白(PRELP)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Proline Arginine Rich End Leucine Rich Repeat Protein (PRELP) 48T/96T Homo sapiens (Human)
13108 丝聚蛋白(FLG)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Filaggrin (FLG) 48T/96T Homo sapiens (Human)
13109 血小板反应蛋白解整合素金属肽酶4(ADAMTS4)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for A Disintegrin And Metalloproteinase With Thrombospondin 4 (ADAMTS4) 48T/96T Homo sapiens 猴B病毒(BV)ELISA试剂盒(Human)
13110 肌营养不良蛋白关联糖蛋白1(DAG1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Dystrophin Associated Glycoprotein 1 (DAG1) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
下面我们分析Elisa试验操作中可能影响结果的原因,并给出相应的解决办法:
1 选择试剂:选择质量优良的检测试剂,严格按照试剂说明书进行操作,操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。
2 加样:可能原因:
1)血清或血浆标本分离不好即进行加样;
2)手工操作中,加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长(特别是室内温度较高时); 3)加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。
解决办法:
1) 标本为血清:将血液先自然存放1-2小时后,再用3000rmp离心15分钟;标本为血浆:必须使用含抗凝剂的血液标本收集管,采血后必须立即颠倒*混合5-10次,放置一段时间后,3000rpm离心15分钟;若在几天内检测,可放在2-8℃冰箱中,若要贮存,则置于-20℃的低温冰箱内。
2) 加样后及时放入孵箱。
3) 加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自动加样,选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。
5) 标本较多时,请分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育时未贴封片或加盖,使标本或稀释液蒸发,吸附于孔壁,难于清洗*;
2) 孵育时间人为延长,导致非特异性结合紧附于反应孔周围,难以清洗*。解决办法:
1) 贴封片或加盖;
2) 按说明步骤严格控制操作时间。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔与孔之间液体交叉。
2) 采用半自动洗板机洗板时,洗液量不足,导致洗板不*;洗板针堵塞,抽吸不*;洗板不畅,导致洗板效果差。
3) 反应板过多造成洗板等待时间长。 解决办法:
1) 保证洗液注满各孔,洗板针畅通,洗完板后在吸水纸(选择干净、无或少尘的吸水材料)上轻轻拍干;
2) 合理安排,或多用几台洗板机。
5猴B病毒(BV)ELISA试剂盒显色:可能原因:
1) 显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂;
2) 加显色剂时溅出孔外造成液体回流。解决办法:
1) 显色剂尽量在临用前配制,坚持不用过期显色剂,肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用; 2) 加样时保持显色剂不外流;
3) A、B液应避免接触金属器械。
6 终止:可能原因如加终止液时产生较多气泡,导致假阳性增加。所以在加终止液时应避免产生气泡。
7 读板:如读板时板底不清洁等。应保证酶标板清洁。
所以在整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸; 尽可能实现ELISA检测标准自动化,有效提高检测质量。
在实际操作中,除了选择优良试剂外,必须严格按照操作步骤进行操作,同时作好室内质控、室间质评,以严谨的工作作风检测每一份标本,才能保证检测质量。现在国内已有相当数量的单位拥有全自动酶标仪,这对于实现ELISA标准化检测、提高检测质量起到了重要作用。
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